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    我的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染實驗效率低,怎么辦?

    發(fā)布時間: 2021-10-09  點擊次數(shù): 2075次

    脂質(zhì)體介導轉(zhuǎn)染實驗指的是,脂質(zhì)包裹待轉(zhuǎn)染DNA形成復合體,與細胞膜融合或內(nèi)吞,進入細胞。然而,大量的脂質(zhì)體-DNA復合體,只有一小部分能運送到細胞質(zhì)并進入細胞核中。

     

    如何提高脂質(zhì)體介導轉(zhuǎn)染效率的關鍵,就在這一步:提高復合體進入細胞質(zhì)的效率。

     

    1、避免使用陰離子試劑,使用新一代聚陽離子試劑,適用范圍廣,毒性相較以前的脂質(zhì)試劑小。

     

    2、使用陽離子脂質(zhì)與DNA的*佳比例,以及一定數(shù)量細胞的陽離子脂質(zhì)用量??上蛸徺I試劑的公司進行詢問。

     

    這是因為過量的脂質(zhì)容易受到培養(yǎng)皿中其他帶電荷物質(zhì)的干擾,如細胞外基質(zhì)中的硫酸軟骨素。

     

    3、待轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)細胞應該從凍存庫中重新培養(yǎng)。轉(zhuǎn)染過程中,細胞在匯合狀態(tài)不應超過24小時,單層細胞應處于對數(shù)中期。

     

    4、轉(zhuǎn)染過程中,培養(yǎng)基不建議加入抗生素。轉(zhuǎn)染試劑使細胞通透性增加,進入細胞的抗生素濃度增加,會產(chǎn)生一定的細胞毒性。

     

    5、某些血清蛋白可能會干擾脂質(zhì)體-DNA復合體形成,因此應在無血清狀態(tài)下形成復合體,后續(xù)過程可添加血清。

     

    6、提高待轉(zhuǎn)染基因的純度,DNA的260nm:280nm應為1.8 。

     

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