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    如何培養(yǎng)大鼠平滑肌細(xì)胞?

    發(fā)布時間: 2022-10-24  點擊次數(shù): 1216次

    一、  器械
    顯微器械:眼科剪一把,直彎眼科鑷各一把,細(xì)結(jié)鑷一把,手術(shù)刀一把,針頭諾干
    殺老鼠器械:手術(shù)剪一把,大鑷子一把,彎眼科鑷一把,組織鉗一把,50ml燒杯一個(錫紙包好)
    另外:10ml離心管兩個,培養(yǎng)皿兩個,10ml的瓶子三個,小濾器兩個,硅膠板一塊,培養(yǎng)瓶蓋子諾干

    二、試劑
    D-HANKS液250ml,雙抗2ml(青霉素16萬U/ml鏈霉素15萬U/ml),一型膠原酶,木瓜酶,BSA。后三種加上D-HANKS配成1ml的消化液,終濃度皆為1mg/ml。無血清DMEM和含20%FBS的DMEM

    三、步驟
    1.  取大鼠,稱重,水合氯醛0。3ml/100g腹腔麻醉
    2.  綁好大鼠,先剪開腹腔,剪斷腹部大動脈放血,后剪開胸腔,取肺
    3.  放入燒杯,后移入超凈臺,置于冰盒上。以后的操作皆在冰盒上操作
    4.  倒入已加雙抗的D-HANKS,清洗肺部,扯掉食管,剪掉心臟
    5.  用針頭將肺固定在硅膠板上,硅膠板置于培養(yǎng)皿里
    6.  用鑷子將肺的內(nèi)外膜除去,只剩下平滑肌
    7.  用眼科剪將肺部剪成1-2mm的小碎塊
    8.  將碎塊移入配好的消化液中,放入培養(yǎng)箱中,消化15min
    9.  取出,加入無血清的DMEM,約10ml,移入離心管中
    10.  980轉(zhuǎn)/min,離心10min
    11.  倒掉上清,加入約1ml含20%FBS的DMEM
    12.  將碎塊用滴管加入25ml的培養(yǎng)瓶里,液體不要加多,有種濕濕的感覺即可。一到兩天可以再加點液體
    13.  大概五到七天可以爬出


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